SEMANA 13- 2/10

Hoy realizamos un Western Blot para ver si los niveles de la podocalixina y de la nefrina sufrian alguna alteracion en ratas experimentales. Para esto experimentamos en el mismo Western, con una muestra de una rata control (sin toxina) y una muestra de una rata experimental (con toxina).
La técnica es un método que se utiliza tanto en biología molecularcomo en bioquímica e inmunogenética para la detección de proteínas en una muestra de un tejido homogeneizado o de un extracto. Para esto se implementa un gel de electroforesis para asi separar proteínas desnaturalizadas de la masa. Las proteínas son transferidas desde el gel hacia la membrana (originalmente de nitrocelulosa), donde son examinadas utilizando anticuerpos específicos para la proteína. Utilizando esta técnica se pueden examinar la cantidad de proteínas en una muestra y comparar los niveles de presencia entre varios grupos.
En nuestro caso, como queriamos identificar la presencia de dos proteínas (podocalixina y nefrina) las cuales tienen diferente peso molecular, preparamos el gel poliacrilamida con diferentes concetraciones para que asi cada proteína pueda correr por el gel correspondiente. La nefrina al ser la de mayor peso molecular, lo preparamos al 10%, mientras que el gel de la podocalixina lo preparamos en 7.5%.
Los geles los preparamos de la siguiente manera:

7,5 % 10%
(podocalixina) (nefrina)

Acilamida 3,8 ml 5ml

Tus pH 8,8 3,75ml 3,75ml

SDS 10% 0,15ml 0,15ml

APS 10% 60μ 60μ

Temed 8μ 8μ

H2O d 7,4ml 6,1ml

Esta experiencia nos duro mas de un dia, es por eso que los resultados los obtendremos la proxima semana.

Hasta la proxima,
Barbi y Melu.